En el reparto destacan sus dos grandes protagonistas: Michelle Jenner, que da vida a la reina Isabel de Castilla y Rodolfo Sancho, quien se mete en la piel de Fernando II de Aragón.
Sin embargo, 'Isabel' es una historia por la que desfilan decenas de personajes relevantes en la corte y en la nobleza y a los que interpretan actores y actrices de la talla de Pablo Derqui, Bárbara Lennie, Clara Sanchís, Pere Ponce, Víctor Elías, Pedro Casablanc o Ginés García Millán, entre otros muchos.
En el primer capítulo, Isabel y su hermano Alfonso viven felices en Arévalo con su madre Isabel de Portugal, viuda del rey Juan II de Castilla, junto a su tutor Juan Chacón y su mujer, Beatriz de Bobadilla.
No obstante, esa vida apacible se va a haber truncada el día que son llevados por la fuerza a la corte de Segovia por orden de su hermanastro, el rey Enrique IV, con motivo del embarazo de su esposa, doña Juana de Avis.
De esta manera, Isabel y Alfonso quedan bajo el cuidado de la reina, que los desprecia y teme a la vez porque constituyen una amenaza para el futuro de la hija que está esperando.